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多肽合成常见问题


定制多肽服务

Q:多肽定制服务的质量如何控制?
A:科生景肽的多肽严格按照ISO质量管理体系进行生产,对每条多肽都进行唯一的编号管理,对粗品,纯化收集液以及最终冻干品进行三道HPLC以及MS检测分析,确保产品的正确性,产品的质量。

Q:多肽纯度是如何计算的?
A:科生景肽是通过反相高效液相色谱(RP-HPLC )测定目标肽中肽键在特定吸收波长下的紫外吸收值计算得到多肽纯度的,用水和乙腈梯度洗脱的方式来分离提纯得到。其中,水分和残留的盐分并不能通过UV检测器进行测定,检测结果还存在其他一些杂质,包括残缺序列肽(比目标肽少一个或更多氨基酸残基的短肽)、截序列(因防止残缺序列肽的产生封端产生的多肽)、脱保护不完全的肽 (合成或者最终切割过程中产生的多肽)。

Q:什么是多肽的净含量(肽含量),它的意义是什么?
A:理解多肽净含量和多肽总重(毛重)的区别是非常重要的。干品多肽的重量中不仅仅包含多肽,还包含有一些非肽的组份,如水,被吸收的溶剂、配位离子和盐等。肽的净含量是指肽在其中的重量百分比,这个百分比的数值范围很大,可能从50%到90%,取决于纯度、序列以及合成和纯化的方法,不要将肽的净含量和肽的纯度混为一谈,它们是完全不同的两个概念。纯度通常是由HPLC决定的。纯度定义的是多肽样品中含正确序列的组分的百分比,而肽的净含量是指样品中肽类物质相对于非肽类物质所占的百分比,肽的净含量通常是用氨基酸组分分析或紫外分光法测定的。这个信息主要是在一些对肽的浓度很敏感的实验中,对计算肽的浓度是很重要的。

Q:为什么含有Cys,Met或Trp的多肽难合成?
A:含有Cys,Met或Trp的多肽难以合成,同时难以获得高纯度的产品。主要因为这些基团不稳定,易氧化。这些多肽的使用和储存都需要特别注意,避免反复开启盖子。

多储存和溶解

Q:多肽状态是如何?
A:   我们提供的多肽是粉末状,一般为白色,组成不同,多肽粉末的颜色有差异,比如有FITC修饰的有些黄绿色等。

Q:如何更好地溶解多肽?
A:    溶解多肽是非常复杂的事情,一般很难一下确定合适的溶剂。通常是先取一点试验,在没有确定合适的溶剂前千万不要全部溶解。
下列方法有助于您选择合适的溶剂:
(1)判定多肽的电荷特定,设定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH为-1;碱性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2为+1,其它氨基酸的电荷为0。计算出将电荷数。
(2)如果净电荷数>0,多肽为碱性,用水溶解:如果不溶解或溶解性不大,加入醋酸(10%以上);如果多肽还不能溶解,加入少量TFA(25ul)溶解,然后加入500ul水稀释。
(3)如果净电荷数<0,多肽为酸性,用水溶解;如果不溶解或溶解性不大,加入氨水(25ul)溶解,然后加入50μLl水稀释。
(4)如果净电荷数=0,多肽为中性,一般需要用有机溶剂如乙腈,甲醇或异丙醇,DMSO等溶解。
还有人建议需要尿素来溶解疏水性很大的多肽。科生景肽提供免费的多肽溶解测试服务为您溶解多肽提供帮助。

Q:什么是平衡离子/反离子,有什么作用和影响?
A:在化学术语中,反离子是溶液或电化学系统中与另一个离子具有相反电荷的离子。在多肽合成中,反离子如TFA用于将多肽与树脂分离以及高效液相色谱分离。具体来说,当序列中含有碱性氨基酸,如Arg、His和Lys或含有N端游离氨基时,需要TFA进行质子化,从而得到TFA盐。但是在细胞方面的实验中,高浓度TFA可能会有一定的影响。科生景肽提供了两种优质TFA去除服务:保证型TFA 去除(保证TFA含量<1% )和标准型TFA去除(TFA<10% )。

Q:偶联载体蛋白的多肽溶液为什么偶尔会出现浑浊?
A:常用的载体蛋白有血蓝蛋白(KLH)、牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)三种,由于载体蛋白的分子较大,结构较复杂, 其水溶性有限,导致少部分多肽偶联完载体蛋白后,溶液中会出现絮状的悬浊液,不是完全澄清透明的。一般情况下,这并不影响其免疫原性,浑浊液可以用于免疫反应。